Los intereses políticos y económicos de los venecianos sobre las tierras del Milanesado les aliaron con los franceses. Frente a ellos se unieron nuevamente el papa, el emperador de Alemania, el duque de Milán y el rey católico. Este envió de nuevo a don Hugo de Cardona, virrey de Nápoles, al frente de un ejército cuya caballería pesada de hombres de armas mandaba una vez más Próspero Colonna.

En una penosa marcha de cinco días arrastrando la artillería, el ejército francés atravesó los Alpes mientras el ejército de español estaba acampado en las inmediaciones de Verona. Al pie de esta cordillera los franceses tropezaron con la caballería de Próspero Colonna, que se había destacado del ejército, la cual fue sorprendida en Villafranca y hecha prisionera con su jefe al frente, el 15 de agosto de 1515.

Los invasores franceses, entre los que se incluía Pedro Navarro, se apoderaron de Novara, Vigerano y Pavía, y se dirigieron hacia Milán. Mientras tanto, los venecianos avanzaban hacia Verona, por lo que don Hugo de Cardona se vió entre ambos ejércitos enemigos, dejó guarniciones en Verona y Brescia y pasó a refugiarse a la otra orilla del rio Po.

Por su parte, el duque de Milán había contratado 30.000 soldados mercenarios suizos. Estos se cansaron de esperar en vano al ejército español, que no acudía a reunirse con ellos, y optaron por atacar al ejército francés. De esta manera se dió la batalla de Marignano, en la que la infantería francesa armada con arcabuces y al mando de Pedro Navarro logró deshacer los compactos escuadrones de la invicta infantería suiza.

A resultas de la batalla, las tropas francesas entraron victoriosas en Milán, y el Milanesado quedó en poder del rey Francisco I. Pero cuando Carlos I de España sucedió al rey católico estalló de nuevo la guerra entre España y Francia por la posesión del ducado, que ocasionó cuatro campañas más entre 1521 y 1544.